一、產(chǎn)品介紹
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外觀： |
灰白色無定形粉末 |
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比 活 性： |
≥150U/mg |
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穩(wěn) 定 性： |
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分 子 量： |
大約55KD |
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等 電 點： |
4.8 |
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米氏常數(shù)： |
1.09x10-4M（G-6-P），1.4x10-4M（NAD+） |
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抑 制 劑： |
不受疊氮鈉的抑制 |
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pH穩(wěn)定性： |
5.0～10.5 （Fig.4-1） |
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最 適pH： |
8.5 （Fig.4-2） |
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最適溫度： |
55℃以上 （Fig.4-3） |
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熱穩(wěn)定性： |
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二、 酶活測定方法
1、 原理：
2、酶活定義：
1個酶活單位等于在以下反應條件下1分鐘內轉化1微摩爾NAD形成NADH所需要的酶量。
3. 檢測方法
3.1 樣品稀釋液的配制
配制0.05M，pH7.5的Tris-HCl緩沖液，緩沖液中添加0.1%牛血清白蛋白。
3.2 酶活檢測試劑配制方法
試劑A：配制0.05M，pH7.8的Tris-HCl緩沖液，緩沖液液中添加含0.0033M的氯化鎂。
試劑B：配制濃度為60mM 的NAD+溶液 (現(xiàn)用現(xiàn)配)。
試劑C：配制0.1M的葡萄糖-6-磷酸溶液（現(xiàn)用現(xiàn)配）
3.3待測樣品的配制
檢測前用臥氏稱量管稱量所需酶，酶稱量時，應至少稱量10mg的酶，以保證稱量的準確性。用酶稀釋液溶解，定容到配制體積。根據(jù)理論酶活，用樣品稀釋液將樣品儲備液稀釋至50-200 U/L
3.4 酶活檢測步驟
測定前將試劑放入冰水浴中，降溫到30度以下。
按比例依次加入以下試劑：2.7ml的試劑A、0.1ml的試劑B、0.1ml的試劑C，30℃預熱300秒，加待測酶液0.1ml（空白對照取0.1毫升酶稀釋液），在340nm測定加樣后4-5分鐘之間的吸光度變化率。此法酶的線性為60-200U/L，檢測時用該濃度區(qū)段的標本進行檢測。
3.5 酶活力計算公式
酶活力（U/L）= △A/min×Vt× D×1000 =△A/min×4820×D
6.22×Vs×d
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Vt |
：反應液總體積 （ml） |
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ε |
：NADH摩爾吸光系數(shù) 6.22 （cm2/micromole） |
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Vs |
：待測酶液的體積 （ml） |
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d |
：比色杯光徑 (cm) |
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D |
：稀釋倍數(shù) |
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△A/min |
：△A/min（待檢樣品） －△A/min（空白）（單位：ABS/min） |
三. 附圖
IVD原料