如何獲取可溶性蛋白

如果需要獲得具有一定活性的表達蛋白，那么最好讓蛋白可溶形式表達，避免包涵體形成。避免包涵體的方法很多，比如：選用表達量不高的表達系統(tǒng)，選擇有助于可溶性表達的融合表達系統(tǒng)比如pThio，pMal等等，對于T7系統(tǒng)來說降低或者減少誘導(dǎo)條件(例如降低ITPG濃度減少T7聚合酶)從而降低表達速度，使用基本培養(yǎng)基等也有助于可溶性表達。另外一個容易忽視的問題是大腸桿菌內(nèi)還原性過高會導(dǎo)致二硫鍵不能正確形成，同樣容易導(dǎo)致表達產(chǎn)物不溶，更換菌株例如Novagen的Origami系列也有助于解決這個問題。還有一種方法是當(dāng)?shù)鞍讙煸谥由系臅r候，在還原和氧化的谷胱甘肽存在的情況下用濃度從6M到0M的鹽酸胍過柱，促使蛋白的折疊。在蛋白重新折疊后用咪唑洗脫。德泰的上清蛋白表達服務(wù)通過條件矩陣正交優(yōu)化的方法，使重組蛋白表達在上清液中，即獲得具有相當(dāng)活性的表達蛋白